PCR analise: wat is dit? Hoe om die PCR analise neem

Dit nie so lank gelede het 'n betroubare, hoogs sensitiewe en vinnige metode vir die diagnose van verskeie aansteeklike siektes in die mens. So 'n metode staan bekend as "PCR analise". Wat is dit, wat is die essensie, wat hy mikro-organismes kan identifiseer en hoe om dit te neem, sal ons beskryf in hierdie artikel.

Geskiedenis van die ontdekking

Uitvinder van die polimerase kettingreaksie (PCR) is 'n Amerikaanse wetenskaplike Keri Myullis in 1983. Aanvanklik het die gepatenteerde metode van diagnose deur "Cetus Corporation," waarin hy gewerk het en sy skepper. Maar in 1992 alle regte en patente is verkoop aan die maatskappy "Hoffman-La Roche." Daarna het dit geblyk dat soortgelyke studies in parallel is uitgevoer en was gerapporteer deur ander Amerikaanse bioloë, soos Elis Chen, David Edgar, John rre. In 1980 besig hy in hierdie saak en die Sowjet-wetenskaplikes A. Slyusarenko A. Kaledin en S. Gorodetsky. Daarom, om vas te stel die uitsluitlike kopiereg eienaar nie moontlik gewees het. Baie uitstaande biochemici bygedra het tot die ontwikkeling van metodes van polimerase reaksie en CERN gepatenteerde hul innovasies. Op hierdie punt ontleding van PCR is uit die hele spesiaal toegeruste laboratoriums uitgevoer.

OPSOMMING PCR diagnostiese

PCR analise: wat is dit en hoe werk dit? Die kern van die metode lê in die feit dat deur die gebruik van 'n spesiale ensiem DNA polimerase in vitro te verhoog in volume spesifieke mikrobiese omgewing. Om hierdie herhaaldelik vermenigvuldig beskikbaar DNA materiaal doen. So, die teenwoordigheid van 'n patogeen in 'n monster van die bedrag sal verhoog word ten koste van die biochemiese laboratorium manipulasie, en bakterieë sal nie moeilik om op te spoor in die mikroskoop wees.

Hoe is die studie van die materiaal?

Om uit te voer die ontleding vereis:

• Die DNA templaat;
• primers materiaal verbind uithoeke van die fragment;
• thermostable DNA polimerase ensiem;
• chemikalieë, verseker behoorlike werking van ensieme;
• bufferoplossing is wat nodig is vir die skep van die nodige voorwaardes vir die groei en ontwikkeling van DNA materiaal.

Uit te voer PCR bedryf 25-30 herhalings wat bestaan uit drie stappe: denaturasie, uitgloeiing en verlenging.

Om polimezarnoy kettingreaksie analiseer met behulp van 'n spesiale toestel - cycler. Moderne toerusting kan jy die nodige verhitting en verkoeling buise program om foute uit te skakel tydens die diagnose te installeer.

Waar om die diagnose van toepassing?

Polimezarnoy kettingreaksie metode word gebruik in verskeie velde van medisyne:

• Forensiese gebruik dit om die genetiese materiaal te identifiseer, soos hare, speeksel of bloed;
• PCR analise van bloed help om genotipering, bv vir die opsporing van individuele genetiese geplant reaksie op 'n spesifieke dwelm;
• deur 'n metode stel familiebande tussen mense;
• mees gesogte-PCR metode geword het in mediese diagnose vir die bepaling van verskeie aansteeklike siektes.

Wat infeksies openbaar PCR?

So, medisyne is lank reeds suksesvol gebruik PCR analise. Wat is dit, het ons reeds geleer het. En 'n paar patogene kan opgespoor word met dit? PCR gediagnoseer volgende infeksies :

• hepatitis A, B, C,
• ureaplasmosis;
• candidiasis;
• chlamydia;
• mycoplasmose;
• bakteriële vaginosis;
• aansteeklike mononukleose;
• trigomoniase;
• MPV infeksie;
• tuberkulose;
• herpes infeksie van die 1ste en die 2de tipe;
• Helicobacter pylori infeksie;
• cytomegalovirus;
• witseerkeel,
• salmonellose;
• MIV-infeksie.

Ook, is PCR metodes gebruik in die diagnose van kanker.

voordele van die metode

Diagnostiese PCR het verskeie voordele:

1. Hoë sensitiwiteit. Selfs met net 'n paar DNA molekules mikro-organisme PCR analise bepaal die teenwoordigheid van infeksie. Dit help metode vir chroniese en latente siektes voorkom. Dikwels in sulke gevalle, die mikro-organisme is onbewerkte op ander maniere.
2. Ten einde enige geskikte materiaal te ondersoek, soos speeksel, bloed, seksuele seleksie, hare, epiteelselle. Die mees algemene is 'n bloedtoets en urogenitale depper PCR.

3. Nie vereis dat 'n uitgebreide groeiende kulture. Die outomatiese proses van diagnose moontlik maak om na 4-5 ure resultate van 'n studie te verkry.
4. Die metode is byna heeltemal outentieke. Aangeteken net geïsoleerde gevalle van vals-negatiewe gevolg.
5. Vermoë om verskeie tipes patogene te identifiseer in een monster materiaal. Dit versnel nie net tot die proses van diagnose van die siekte, maar ook aansienlik verminder materiaal koste. Dikwels is die dokter skryf 'n omvattende ontleding van die PCR. Prys opname, wat bestaan uit die bepaling van die ses patogene, is sowat 1500 roebels.

Aanbevelings oor die voorbereiding vir analise

Die resultate om geldig te wees PCR studies nodig om getoets te word, na aanleiding van die aanbevelings van die voorlopige voorbereiding vir die diagnose:

1. Voor die bevalling van die speeksel moet weerhou van eet en dwelm vir 4 ure voor die monsterneming van die materiaal. Onmiddellik voor die prosedure, spoel jou mond met kookwater.
2. Bogenoemde reëls moet gelei word en by die neem van die monster van die binnekant van die wang. Na spoel word aanbeveel 'n ligte massering uit te voer op die vel te prostaat afskeidings vry te stel.
3. Urine is gewoonlik afgehaal word by die huis. Om dit te doen, moet jy 'n deeglike toilet van geslagsdele te voer. In 'n steriele plastiekhouer is nodig om 50-60 ml urine versamel. Dit word aanbeveel vir vroue om die tampon te voeg in die vagina, en die mense so veel as moontlik om te trek die vel vou om die suiwerheid van die materiaal te verseker. Jy kan die materiaal nie tydens menstruasie.
4. Vir die lewering van die saad gedurende die 3 dae voor die versameling van materiaal van seksuele omgang te onthou. Ook, is dokters aangeraai om die gebruik van die sauna en warm bad, alkohol en gekruide kos te laat vaar. Vir 3 uur voor analise is nodig om te onthou van urineer.
5. Om die urogenitale smeer slaag, byvoorbeeld, indien die analise op 'n chlamydia PCR, beide mans en vroue word aanbeveel dat seksuele res vir 3 dae. 2 weke voor die analise kan nie antibiotika neem. Vir 'n week moet jy ophou met behulp van die intieme gels, salf, vaginale setpille, douching. 3 uur voor die studie moet weerhou van urineer. Tydens menstruasie heining materiaal nie uitgevoer word, kan net 3 dae na die beëindiging van spot urogenitale smeer neem.

PCR tydens swangerskap

Die wagtydperk vir 'n baba, baie aansteeklike siektes, seksueel oordraagbare siektes, is uiters gevaarlik vir normale fetale ontwikkeling. Seksueel oordraagbare siektes kan intrauterine ontwikkeling, miskraam of premature geboorte, aangebore misvorming van die kind te aktiveer. Daarom is dit belangrik in die vroeë swangerskap sifting PCR te kry. Slaag analise nodig is by die registrasie - tot 12 weke.

Heining materiaal is afkomstig van die servikale kanaal met 'n spesiale borsels. Die prosedure is pynloos en hou geen gevaar vir die baba. Gewoonlik tydens swangerskap ontleed vir Chlamydia PCR metode, sowel as ureaplasmosis, mycoplasmose, cytomegalovirus, herpes, papillomavirus. So 'n ondersoek komplekse genoem PCR 6.

PCR vir die diagnose van MIV

As gevolg van die feit dat die metode van polimerase kettingreaksie is baie sensitief vir veranderinge in die liggaam en die voorwaardes van diagnose, kan baie faktore die uitslag beïnvloed. Daarom PCR analise vir MIV-infeksie is nie 'n betroubare metode, sy doeltreffendheid - 96-98%. Die oorblywende 2-4% van die toets vals positiewe resultate.

Maar in sommige gevalle sonder PCR diagnose van MIV kan doen nie. Gewoonlik word dit gedoen om mense met vals-negatiewe ELISA. Hierdie syfers dui daarop dat die persoon nog nie ontwikkel teenliggaampies om die virus en nie opgespoor kan word sonder om die aantal meervoudige. Dat dit bereik kan word deur die uitvoer van 'n bloedtoets PCR metode.

Ook nodig is 'n diagnose van kinders eerste jaar van die lewe, gebore om MIV-positiewe moeders. Die metode is die enigste manier om 'n betroubare die status van die kind te bepaal.

PCR vir die diagnose van hepatitis

Polimerase kettingreaksie metode laat opsporing van DNA van die virus van hepatitis A, B, C, lank voor die vorming van teenliggaampies om die infeksie of simptoom aanvang. Veral effektief is die PCR analise op hepatitis C, aangesien 85% van sodanige siekte is asimptomaties en sonder tydige behandeling word chroniese.

Tydige opsporing van die patogeen sal help vermy komplikasies en langtermyn behandeling.

Geïntegreerde PCR vertoning

Omvattende PCR analise: wat is dit? Hierdie vertoning metode polimezarnoy kettingreaksie wat gelyktydig sluit die bepaling van 'n paar spesies infeksie: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, candida, Trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealitikum, herpes 1 en 2 tipe, gonorree papillomavirus. Die prys van hierdie diagnose wissel van 2000 tot 3500 roebels. na gelang van die kliniek, materiaal en toerusting, sowel as op die tipe van analise: kwalitatief of kwantitatief. Wat nodig is in jou geval - die dokter besluit. In sommige gevalle, jy moet net eenvoudig op te spoor die teenwoordigheid van die patogeen in ander, soos MIV, die belangrike rol wat kwantitatiewe titer. verwys as "PCR analise van 12" in die diagnose van al die bogenoemde patogene ondersoek.

Beskrywing van die resultate analise

Transkripsie PCR analise is eenvoudig. Daar is slegs 2 indeks skaal - ". Negatiewe" "positiewe" en Op die opsporing van die patogeen kan dokters met% vertroue 99 -de bevestig die teenwoordigheid van die siekte en die behandeling van die pasiënt begin. In die kwantitatiewe metode van bepaling van infeksie in 'n ooreenstemmende kolom indeks aantal bespeur bakterieë sal gespesifiseer word. Slegs 'n dokter kan die omvang van die siekte te bepaal en voorskryf die nodige behandeling.

In sommige gevalle, byvoorbeeld in die bepaling van MIV-infeksie deur PCR, met 'n negatiewe gevolg, daar is 'n behoefte aan bykomende opnames om hierdie syfers te bevestig.

Waar om getoets?

Waar slaag-PCR analise in die openbare kliniek of 'n private laboratorium? Ongelukkig, in die munisipale mediese instellings toerusting en metodes word dikwels verouderd. Daarom is dit beter om voorkeur te gee aan private laboratoriums met moderne toerusting en hoogs gekwalifiseerde personeel. Daarbenewens, in 'n private kliniek kry jy die resultate baie vinniger.

In Moskou, baie private laboratoriums bied PCR analise vir verskeie infeksies. Byvoorbeeld, in so 'n klinieke as "Vita", "Geïntegreerde Clinic," "gelukkige gesin", "Uro-Pro", uitgevoer PCR analise. Opname prys is 200 roebels. vir die bepaling van 'n patogeen.

Dit kan afgelei word dat die diagnose van aansteeklike siektes deur PCR in die meeste gevalle is 'n vinnige en betroubare manier om die opsporing van die patogeen in die liggaam by die vroeë stadiums van infeksie. Tog, in sekere gevalle, om ander metodes van diagnose kies. Bepaal die behoefte aan so 'n studie kan slegs 'n spesialis wees. PCR analise Decryption vereis ook 'n professionele benadering. Volg jou dokter se raad en doen hul eie toetse, wat nie nodig is nie gee.